IFA-PGA是寧夏乙征生物工程有限公司與華東理工大學(xué)共同開(kāi)發(fā)的一款新型固定化酶,其可以高效地催化青霉素G或頭孢G酸水解生產(chǎn)6-APA或7-ADCA,也可以用于催化合成其他半合成青霉素和頭孢菌素。此外,IFA-PGA也能用于催化制備手性氨基酸、氨基醇、肽等眾多手性醫(yī)藥化工產(chǎn)品。
IFA-PGA基因來(lái)源于糞產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes faecalis),在大腸桿菌中高效異源表達(dá),經(jīng)發(fā)酵生產(chǎn)、分離純化后,以共價(jià)結(jié)合的方法固定化在多孔顆粒狀高分子樹(shù)脂上,該固定化酶蛋白結(jié)合牢靠,穩(wěn)定性極高。
IFA-PGA的特性
糞產(chǎn)堿桿菌來(lái)源的青霉素G?;福≒GA)分子由兩個(gè)亞基組成的,與來(lái)自于大腸桿菌的PGA相比較,僅有53%的DNA序列同源和49%的蛋白序列同源,其兩個(gè)亞基之間可以形成二硫鍵。IFA-PGA的酶學(xué)性質(zhì)有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn):(1)IFA-PGA 對(duì)底物具有更高親和力,對(duì)青霉素G的Km值比大腸桿菌PGA低,比巨大芽孢桿菌PGA低三個(gè)數(shù)量級(jí),其Kcat值是所有PGA中最高的;(2)IFA-PGA是PGA家族中唯一具有鏈內(nèi)二硫鍵的成員,酶的熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性均很高;(3)在手性分子識(shí)別上,IFA-PGA比大腸桿菌PGA、巨大芽孢桿菌PGA具有更高的選擇性;(4)IFA-PGA在有機(jī)溶劑中表現(xiàn)出很高的穩(wěn)定性。
IFA-PGA的最適溫度在60-65℃,最適pH在8.0,水解青霉素的最適底物濃度在8-10%,水解頭孢G酸的最適底物濃度在10-12%。
IFA-PGA產(chǎn)品性質(zhì)
產(chǎn)品品牌 | IFA-PGA |
外觀 | 灰白色的顆粒(不同批次之間顏色略有不同,但不影響酶活) |
載體 | 具有環(huán)氧基團(tuán)的微孔球狀樹(shù)脂 |
顆粒大小 | 100-300μm |
固定化方法 | 共價(jià)結(jié)合法 |
水份 | 大約為濕重的45-55% |
活性(測(cè)定條件:2%Pen.GK, 28°C, pH8.0, 0.02M的磷酸緩沖液) | 具體數(shù)據(jù)待定U/g (濕重) |
IFA-PGA對(duì)青霉酸G鉀鹽、頭孢G酸、6-APA、7-ADCA、苯乙酸的表面吸附 | 未檢測(cè)到 |
穩(wěn)定性 | 在4°C密閉儲(chǔ)存保質(zhì)期12個(gè)月以上 |
IFA-PGA的活力測(cè)定
在100 ml玻璃夾套反應(yīng)器中,加入 50 ml 2 %Pen.GK溶液 (用0.02M的磷酸緩沖液配置),將pH計(jì)探頭插入液面以下以檢測(cè)反應(yīng)液pH,采用機(jī)械攪拌,攪拌轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分,反應(yīng)過(guò)程中用循環(huán)水浴控制反應(yīng)溫度在30℃,預(yù)熱5 min后加入固定化酶mg,反應(yīng)開(kāi)始后pH下降,用堿式滴定管滴加0.1 M的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液保持反應(yīng)體系pH 穩(wěn)定在8.0,反應(yīng)開(kāi)始后3 min開(kāi)始計(jì)時(shí),用秒表準(zhǔn)確計(jì)時(shí)5 min后停止滴加NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液,記錄5min內(nèi)消耗的堿液體積以計(jì)算每克固定化IFA-PGA的酶活,計(jì)算公式如下:
公式中A為固定化酶酶活(U/g),VNaOH為NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗的體積(ml),m為固定化酶的質(zhì)量(g)。
包裝與儲(chǔ)存
本品采用聚乙烯塑料桶包裝,規(guī)格有30公斤/桶、50公斤/桶,也可以根據(jù)客戶的需要定制包裝規(guī)格。
要求儲(chǔ)藏在4 ℃密閉空間內(nèi),避免陽(yáng)光直射和水分散失。
寧夏乙征生物工程有限公司 廠址:寧夏中衛(wèi)市工業(yè)園區(qū)
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